الوينت الأجسام المضادة المناعية

 

اسم المنتج	قطة. لا.	المواصفات ..
الوينت الأجسام المضادة المناعية	G1266	30 مل

 

 

يستخدم هذا المنتج لشطف الأجسام المضادة الأولية والثانوية أثناء التألق المناعي (IF)، والكيمياء المناعية (IHC)، والكيمياء المناعية (ICC) المناعية للأنسجة والخلايا. يتمتع شاطف الجسم المضاد المناعي هذا بمزايا التشغيل البسيط والظروف المعتدلة وتأثير الشطف القوي. يمكنه شطبة الأجسام المضادة الأولية والثانوية تمامًا دون الإضرار ببنية العينة وشكلها. إنها مناسبة بشكل خاص لمراوغة الجسم المضاد في تجربة التألق المناعي متعددة العلامات الخاصة بـ TSA لمقاطع البارافين، والمقاطع المجمدة، وشرائح الخلايا، ومسحة الخلايا، وما إلى ذلك من الدماغ، والعظام، والجلد، والصمام الأبهري، وما إلى ذلك. الجسم المضاد الأولي غير المرتبط تساهميًا وتمت مقاطعة البروتين المستهدف والجسم المضاد الثاني والجسم المضاد الأولي وإزالته لإزالة التأثير على وضع العلامات اللاحقة على الأجسام المضادة.

 

 

تخزين ونقل بدرجة 2~8، صالح لمدة 6 أشهر.

 

 

رقم المكون	عنصر	جم1266-30 مل
G1266	شاطف الأجسام المضادة المناعية	30 مل
يدوي		1 جهاز كمبيوتر

 

 

هذا المنتج جاهز للاستخدام ولا يحتاج إلى تخفيف. قبل الاستخدام، قم بإزالة شاطف الجسم المضاد من الثلاجة وأعده إلى درجة حرارة الغرفة قبل إضافة كمية صغيرة من شاطف الجسم المضاد لتغطية العينة، واحتضانه في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق، ثم تخلص من الشاطف، وأضف ما يكفي من الشاطف مرة أخرى لتغطية الأنسجة بالكامل ، احتضان عند 37 درجة لمدة 30 دقيقة، ضع الشريحة في TBST واغسلها على طاولة الرج لمدة 3 مرات، لمدة 5 دقائق في كل مرة.

يتم وصف تطبيق شاطف الجسم المضاد بالتفصيل مع مثال وضع العلامات الفلورية المتعددة TSA في أقسام البارافين:

1. تمت إزالة الشمع من أجزاء الأنسجة إلى الماء: بالتتابع، تم وضع المقاطع في محلول إزالة الشمع الصديق للبيئة I (G1128) لمدة 10 دقائق - محلول إزالة الشمع الصديق للبيئة II (G1128) لمدة 10 دقائق - محلول إزالة الشمع الصديق للبيئة III (G1128) ) لمدة 10 دقائق - إيثانول لا مائي Ⅰ لمدة 5 دقائق - إيثانول لا مائي Ⅱ لمدة 5 دقائق - الإيثانول اللامائي Ⅲ لمدة 5 دقائق - ويغسل بالماء المقطر؛

2. إصلاح المستضد: وفقًا لنوع الأنسجة ونوع الجسم المضاد، حدد محلول إصلاح المستضد المقابل (G1219,pH6.0; G1207,pH8.0; G1218,pH9 .0) ووضع الإصلاح لإصلاح المستضد. طريقة الإصلاح العامة هي أداة إصلاح المستضد (منتجات Servicebio القادمة)، والميكروويف، والضغط العالي والإصلاحات الأخرى ذات درجة الحرارة المرتفعة. أثناء هذه العملية، يجب منع محلول الإصلاح من التبخر الزائد ويجب عدم تجفيفه. بعد التبريد الطبيعي، تم وضع الشريحة في برنامج تلفزيوني (G2156) وغسلها بالرج على طاولة البندول (SYC-Z100) لمدة 3 مرات، 5 دقائق في كل مرة.

3. رسم دائرة بقلم Pap Pen وختمها ببيروكسيد الهيدروجين: بعد أن تجف المقاطع قليلاً، ارسم دوائر حول الأنسجة باستخدام قلم Pap Pen (G6100)، الذي يبعد بشكل عام حوالي 3 مم عن الأنسجة. بعد الانتهاء من الدوائر، اغسلها بالماء النقي (G4701) أو PBS (G2156) بعد تجفيف الدوائر، ثم ضع المقاطع في محلول بيروكسيد الهيدروجين بنسبة 3٪ واحتضانها في درجة حرارة الغرفة لمدة 25 دقيقة من أجل منع البيروكسيديز الداخلي. . بعد الإغلاق، تم وضع الشريحة في برنامج تلفزيوني (G2156) وغسلها بالرج على طاولة البندول (SYC-Z100) لمدة 3 مرات، 5 دقائق في كل مرة.

4. حجب المصل: بعد تجفيف القسم قليلاً، تتم إضافة 3% BSA أو مصل إلى الأنسجة ويتم إغلاقه في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة، ويتم تحديد كاشف الحجب وفقًا لأنواع الأجسام المضادة الأولية والثانوية.

5. أضف الجسم المضاد الأولي الأول: رج محلول الختم بلطف، وأضف الجسم المضاد الأولي بنسبة معينة إلى الشريحة، ثم ضع الشريحة بشكل مسطح في صندوق مبلل (SIB-20F)، واحتضنها عند درجة حرارة 4 درجات طوال الليل . (أضف كمية صغيرة من الماء إلى أسفل الصندوق المبلل لمنع تبخر الجسم المضاد)

6. أضف الجسم المضاد الثانوي المسمى HRP المقابل: تم وضع الشريحة في برنامج تلفزيوني (G2156) وغسلها على شاكر البندول (SYC-Z100) لمدة 3 مرات، 5 دقائق في كل مرة. بعد تجفيف الشرائح قليلاً، تمت إضافة الأنسجة المطلية للجسم المضاد الثانوي المسمى بـ HRP من الأنواع المقابلة من الجسم المضاد الأولي إلى الحلقة واحتضانها في درجة حرارة الغرفة لمدة 50 دقيقة.

7. أضف iF488-TSA: تم وضع الشريحة في PBS (G2156) وغسلها بالرج على طاولة البندول (SYC-Z100) لمدة 3 مرات، 5 دقائق في كل مرة. بعد تجفيف الشرائح قليلًا، تمت إضافة سائل العمل iF488-TSA (G1231) المحضر إلى الحلقة واحتضانه لمدة 10 دقائق عند درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. بعد الحضانة، تم وضع الشرائح في TBST (G2150) وغسلها على شاكر البندول (SYC-Z100) لمدة 3 مرات، 5 دقائق في كل مرة.

8. معالجة شاطف الجسم المضاد: بعد أن يتم تجفيف المقاطع قليلاً، يتم نشر شاطف الجسم المضاد المستعاد إلى درجة حرارة الغرفة على الأنسجة بأكملها. بعد الحضانة في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق، تمت إزالة شاطف الجسم المضاد، وأضيفت كمية كافية من شاطف الجسم المضاد مرة أخرى لتغطية الأنسجة بالكامل. بعد التحضين عند 37 درجة لمدة 30 دقيقة، تم وضع الشريحة في TBST (G2150) وغسلها على طاولة البندول (SYC-Z100) لمدة 3 مرات. 5 دقائق في كل مرة.

9. حجب المصل: بعد تجفيف القسم قليلاً، تتم إضافة 3% BSA أو مصل إلى الأنسجة ويتم إغلاقه في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة، ويتم تحديد كاشف الحجب وفقًا لأنواع الأجسام المضادة الأولية والثانوية.

10. أضف الجسم المضاد الأولي الثاني: رج محلول الختم بلطف، وأضف الجسم المضاد الأولي بنسبة معينة إلى الشريحة، ثم ضع الشريحة بشكل مسطح في صندوق مبلل (SIB-20F)، واحضنها عند درجة حرارة 4 درجات طوال الليل . (أضف كمية صغيرة من الماء إلى أسفل الصندوق المبلل لمنع تبخر الجسم المضاد)

11. أضف الجسم المضاد الثانوي المسمى HRP المقابل: تم وضع الشريحة في برنامج تلفزيوني (G2156) وغسلها على شاكر البندول (SYC-Z100) لمدة 3 مرات، 5 دقائق في كل مرة. بعد تجفيف الشرائح قليلاً، تمت إضافة الأنسجة المطلية للجسم المضاد الثانوي المسمى بـ HRP من الأنواع المقابلة من الجسم المضاد الأولي إلى الحلقة واحتضانها في درجة حرارة الغرفة لمدة 50 دقيقة.

12. أضف iF555-TSA: تم وضع الشريحة في PBS (G2156) وغسلها بالرج على طاولة البندول (SYC-Z100) لمدة 3 مرات، 5 دقائق في كل مرة. بعد تجفيف الشرائح قليلًا، تمت إضافة سائل العمل iF555-TSA (G1233) المحضر إلى الحلقة وتم احتضانه لمدة 10 دقائق عند درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء. بعد الحضانة، تم وضع الشرائح في TBST (G2150) وغسلها على شاكر البندول (SYC-Z100) لمدة 3 مرات، 5 دقائق في كل مرة.

13. معالجة شاطف الجسم المضاد: بعد تجفيف المقاطع قليلاً، يتم توزيع شاطف الجسم المضاد الذي تمت استعادته إلى درجة حرارة الغرفة على الأنسجة بأكملها. بعد الحضانة في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق، تمت إزالة شاطف الجسم المضاد، وأضيفت كمية كافية من شاطف الجسم المضاد مرة أخرى لتغطية الأنسجة بالكامل. بعد التحضين عند 37 درجة لمدة 30 دقيقة، تم وضع الشريحة في TBST (G2150) وغسلها على طاولة البندول (SYC-Z100) لمدة 3 مرات. 5 دقائق في كل مرة.

ملاحظة: الخطوات 4-7 هي جولة واحدة من عملية وضع العلامات على الأجسام المضادة، وكل جولة من عملية وضع العلامات على الأجسام المضادة تحتاج فقط إلى تغيير كاشف TSA باستخدام علامات فلوريسئين مختلفة (iF647-TSA G1232; iF594-TSA G1242 ؛ إذا 440-TSA G1250؛ إذا 546-TSA G1251؛ G1252؛ إذا 750-TSA G1258). بعد جولة واحدة من وضع العلامات على الأجسام المضادة، احتضان شاطف الجسم عند 37 درجة لمدة 30 دقيقة، وإزالة الأجسام المضادة الأولية والثانوية المسمى في هذه الجولة، ومن ثم الاستمرار في الجولة التالية من وضع العلامات على الأجسام المضادة. اعتمادًا على عدد الأجسام المضادة الفلورية متعددة العلامات، كرر الخطوات 4-7 حتى اكتمال جميع علامات الأجسام المضادة.

14. نوى الحفاظ على DAPI: بعد تجفيف المقاطع قليلاً، تمت إضافة محلول صبغ DAPI (G1012) إلى الدائرة واحتضانها لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة بعيدًا عن الضوء.

15. تبريد التألق الذاتي: تم وضع الشريحة في برنامج تلفزيوني (G2156) وغسلها بالرج على طاولة البندول (SYC-Z100) لمدة 3 مرات، 5 دقائق في كل مرة. بعد تجفيف المقاطع قليلاً، تمت إضافة مُخمد الأنسجة ذات التألق الذاتي (G1221-2) إلى الحلقة واحتضانها لمدة 5 دقائق في الظلام، ثم شطفها تحت الماء لمدة 10 دقائق.

16. الختم: يتم تجفيف القسم قليلاً وإغلاقه باستخدام قرص الختم المضاد للتألق (G1401).

17. التصوير المجهري: يتم عرض المقاطع تحت المجهر الفلوري ويتم جمع الصور أو مسحها ضوئيًا باستخدام الماسح الضوئي الفلوري.

 

 

1. يعتمد تأثير شطف الجسم المضاد على سمك القسم ودرجة حرارة الشطف ووقت الشطف. تتم معالجة الشرائح بحجم 4 إلى 8 ميكرومتر عادةً في صندوق مبلل عند درجة حرارة 37 درجة لمدة 30 دقيقة.

2. من أجل ضمان تأثير شطف الجسم المضاد ووضع العلامات الفلورية المتعددة العلامات، يوصى بتسمية بروتين الغشاء الهيكلي وبروتين الهيكل الخلوي أولاً، ثم البروتين السيتوبلازمي، وأخيرًا البروتين النووي.

3. إذا كانت بعض الأجسام المضادة لها ألفة قوية وليس من السهل إزالتها تمامًا (مثل أنسجة المخ GFAP)، فيمكن زيادة درجة حرارة الغسيل إلى 50 درجة لمدة 30 دقيقة، أو يمكن زيادة عدد الشطف، أي بعد الإضافة شاطف الجسم المضاد إلى الأنسجة واحتضانه عند 37 درجة لمدة 30 دقيقة، تتم إزالة شاطف الجسم المضاد وإضافة شاطف جسم مضاد جديد، وتستمر الحضانة عند 37 درجة ل 30 دقيقة.

4. إن شاطف الجسم المضاد هذا لديه سيولة قوية، وعندما لا يتم وضع الفيلم أفقيًا، فمن السهل أن يتدفق الكاشف خارج الحلقة، مما يؤثر على تأثير الشطف. من الضروري الانتباه إلى وضع القسم بشكل مسطح أثناء التشغيل.

5. ارتداء القفازات والقناع ومعطف المختبر لتجنب ملامسة الجلد والعينين. في حالة ملامسته للمناطق الحساسة، اشطفيه فورًا بالكثير من الماء.

6. قد ينخفض ​​عيار الكاشف بعد تاريخ انتهاء الصلاحية، لذا يرجى استخدامه خلال تاريخ انتهاء صلاحية الكاشف.

 

للاستخدام البحثي فقط!

 

 

الوسم : شاطف الأجسام المضادة المناعية، الصين مصنعي شاطف الأجسام المضادة المناعية، الموردين، المصنع