سائل تلوين بيروكسيد الهيدروجين النباتي (DAB)

تنتج الأنسجة النباتية مجموعة متنوعة من أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) تحت ظروف الضغط. نشاط ROS كبير جدًا وغير مستقر للغاية، لذا يعتمد اكتشاف ROS عادةً على منتجاته النهائية. بيروكسيد الهيدروجين هو نوع من أنواع الأكسجين التفاعلية. يمكن لبيروكسيد الهيدروجين، المحفز بواسطة الكاتالاز، أن يتفاعل بسرعة مع DAB (3، 3- ديامينوبنزيدين رباعي هيدروكلوريد) لتشكيل مركب بني-أحمر، وذلك لتحديد موقع بيروكسيد الهيدروجين في الأنسجة. وفقًا للمبدأ الأساسي، يطلق عليها أيضًا طريقة DAB. بناءً على المبدأ المذكور أعلاه، يتم استخدام هذا المنتج لتلوين بيروكسيد الهيدروجين في الأنسجة الحية النباتية. يتم تطبيقه بشكل عام على أطراف الجذر الرقيقة والأوراق وغيرها من الصبغات العامة، بعد تلطيخ موقع تراكم بيروكسيد الهيدروجين باللون البني إلى البني الداكن.

نقل الجليد الرطب. يُخزن في درجة 2-8، صالح لمدة 12 شهرًا.

1. تحضير الكاشف: تم إذابة 100 ملغ من DAB بالكامل في 100 مل من محلول الفوسفات للحصول على محلول عمل تلطيخ DAB، والذي تم تخزينه عند 4 درجات تحت الضوء ويكون فعالاً خلال أسبوع واحد. ملحوظة: DAB حساس للضوء ويجب حمايته من الضوء أثناء عملية الذوبان. إذا كان من الصعب حل، يمكن تعزيز الذوبان عن طريق التحريك بالموجات فوق الصوتية والمغناطيسية.

2. اجمع شتلات أو أطراف جذور النباتات المعرضة للإجهاد (مثل المعادن الثقيلة)، واغسلها قليلاً بالماء النقي، وضعها على ورق ترشيح لتصريف الماء الزائد. تم غمر شتلات النبات أو أطراف الجذر في محلول صبغ عامل تلطيخ DAB في درجة حرارة الغرفة وإبقائه بعيدًا عن الضوء لمدة 2-6 ساعة حتى ظهر الجزء الموجب باللون البني الداكن، وكانت الأجزاء المتبقية عديمة اللون تقريبًا أو أظهرت لون النبات نفسها. (اضبط وقت الصباغة حسب درجة الشباب وتطور لون النباتات)

3. قم بإزالة شتلات النبات أو أوراقه بعناية باستخدام الملقط، واغمرها في الماء النقي واشطفها ذهابًا وإيابًا 3-5 مرات، ثم ضعها على ورق الترشيح لمسح الماء الزائد، ثم اغمرها في 95% من الإيثانول عند 40 درجة لمدة 3-16 ساعة. والغرض من ذلك هو إزالة الكلوروفيل من شتلات النبات أو الأوراق نفسها، ويمكن استبدال الإيثانول الطازج بنسبة 95٪ عدة مرات أثناء إزالة اللون.

4. أخرج الشتلات أو الأوراق باستخدام الملقط، واغمرها في الماء النقي واشطفها ذهابًا وإيابًا لمدة 3-5 مرات، ثم ضعها على ورق الترشيح لامتصاص الماء الزائد، ثم انقل العينات إلى كمية مناسبة من عينة DAB محلول الحفظ ونقعها لمدة 30 دقيقة، ثم التقاط الصور. يمكن تخزين العينات في المحلول في درجة حرارة الغرفة لمدة أسبوع واحد.

1. بعد تحضير محلول عمل تلطيخ DAB، يجب تخزينه في درجة حرارة 4 درجات وإبعاده عن الضوء، واستخدامه خلال أسبوع واحد. وقت التخزين طويل جدًا، سيؤثر على اللون.

2. بما أن بيروكسيد الهيدروجين سهل التحلل وأي عوامل خارجية قد تحفز إجهاد النبات لإنتاج بيروكسيد الهيدروجين، فيجب جمع عينات النباتات طازجة وملطخة في أسرع وقت ممكن. يوصى بمجموعة مراقبة فارغة سلبية وإيجابية.

3. التقط الصور في أسرع وقت ممكن لحفظ النتائج بعد تلطيخ العينة.

4. ارتداء معطف المختبر والقفازات القابل للتصرف أثناء العملية.

للاستخدام البحثي فقط!

الوسم : سائل تلطيخ بيروكسيد الهيدروجين النباتي (dab)، الصين مصنعي سائل تلطيخ بيروكسيد الهيدروجين النباتي (dab)، الموردين والمصنع