مجموعات تلطيخ الجرام

تلوين غرام هو أسلوب تلوين تفاضلي يستخدم على نطاق واسع في علم الأحياء الدقيقة، والذي يمكن استخدامه لتمييز البكتيريا إيجابية الجرام (G+) عن البكتيريا سالبة الجرام (G-). يعتمد المبدأ الأساسي على المكونات الكيميائية المختلفة لجدران الخلايا البكتيرية. بعد الصبغ الأولي باللون البنفسجي البلوري واللامع باليود، تشكل البكتيريا مجمعات بلورية بنفسجية-يودية غير قابلة للذوبان في الماء في جدار الخلية. تحتوي البكتيريا إيجابية الجرام على جدران خلايا سميكة، ولا تحتوي على دهون، وهي غنية بالببتيدوغليكان ومترابطة لتشكل بنية شبكية كثيفة. عند معالجتها بالإيثانول، تنكمش شبكة الببتيدوغليكان، مما قد يمنع مركب اليود البلوري البنفسجي. ويبقى في جدار الخلية مما يمنحها اللون البنفسجي البلوري. من ناحية أخرى، تحتوي البكتيريا سالبة الجرام على جدران خلايا رقيقة ومحتوى ببتيدوغليكان منخفض وارتباطات متقاطعة فضفاضة. عند التعرض للإيثانول، يذوب الغشاء الخارجي الغني بالدهون، وتظهر فجوة كبيرة في جدار الخلية، ويتدفق مركب اليود البنفسجي البلوري، وبالتالي تصبح الخلايا عديمة اللون بعد إزالة اللون من الإيثانول. عند هذه النقطة عن طريق مكافحة سافرانين، سوف تكون ملطخة البكتيريا سالبة الجرام باللون الأحمر.

يحتوي محلول صبغة الجرام على أربعة مكونات، وهي محلول الصبغة البنفسجي البلوري أوكسالات الأمونيوم، ومحلول اليود 1%، ومحلول إزالة الصبغة، ومحلول صبغ الفوشين. بعد التلوين، تظهر البكتيريا إيجابية الجرام باللون الأرجواني إلى الأزرق الأرجواني، وتظهر البكتيريا سالبة الجرام باللون الأحمر.

تخزين ونقل في درجة حرارة الغرفة؛ صالحة لمدة 12 شهرا.

1. قم بإزالة الشمع من جزء البارافين إلى الماء؛ قم بتجفيف اللطاخة البكتيرية بشكل طبيعي أو تسخينها بمصباح كحول لتجفيفها وإصلاحها.

2. الصباغة الأولية: أضف محلول التلوين البنفسجي البلوري قطرة قطرة لتغطية العينة لمدة 10-30 ثانية، ثم اغسلها بالماء، ثم قم بتدويرها حتى تجف.

3. الصباغة اللاذعة: أضف محلول اليود 1% قطرة قطرة لتغطية العينة لمدة 1-1.5 دقيقة، ثم اغسلها بالماء، ثم قم بتدويرها حتى تجف.

4. إزالة اللون: أضف محلول إزالة اللون قطرة قطرة لشطف الأنسجة من أحد طرفي الشريحة لإزالة اللون، حتى لا يظهر محلول إزالة اللون الذي يتدفق للأسفل باللون الأرجواني، ثم اغسله على الفور بالماء لإزالة محلول إزالة اللون. الحرص على السيطرة على الوقت destaining.

5. الصبغ المضاد: أضف محلول الصبغ الفوكسين قطرة قطرة لمدة 20-60 ث، ثم اغسله بالماء. امسح الحواف بورق الترشيح.

6. يمكن ملاحظة المسحات البكتيرية مباشرة بواسطة الفحص المجهري. بعد التجفيف عند 60 درجة، تم تجفيف أقسام الأنسجة بسرعة في الإيثانول المطلق لمدة ثلاث مرات، 1 ثانية، 3 ثوان، و5 ثوان، على التوالي. بعد ذلك، تمت تصفيته بالزيلين لمدة 5 دقائق، ثم تم إغلاقه أخيرًا بصمغ محايد للفحص المجهري.

1. قم بربط الغطاء في الوقت المناسب بعد استخدام الكاشف لمنع المذيب من التطاير.

2. اللطاخة البكتيرية سميكة جدًا، ووقت التلوين البنفسجي البلوري طويل جدًا، وإزالة اللون غير كافية، مما قد يؤدي إلى نتائج إيجابية كاذبة. يوصى بإجراء كل من مجموعات التحكم البكتيرية السلبية والإيجابية.

3. يمكن استخدام كل مجموعة من محلول التلوين لصبغ ما يقرب من 30 قسمًا (تلطيخ قطرة).

4. يرجى ارتداء معطف المختبر والقفازات التي تستخدم لمرة واحدة أثناء العملية.

للاستخدام البحثي فقط!

الوسم : مجموعات تلطيخ جرام، الصين مجموعات تلطيخ جرام المصنعين والموردين والمصنع