طقم الحمض النووي للبراز

تستخدم هذه المجموعة خصائص امتصاص الحمض النووي العكسي لأغشية الألياف الزجاجية، ويمكنها عزل الحمض النووي الجينومي السليم عالي الجودة بسرعة وبشكل موثوق من 100-200 ملغ من عينات البراز الطازجة أو المجمدة. بالاشتراك مع نظام تحلل عازل فريد من نوعه، يمكنه القضاء بشكل فعال على حمض الهيوميك والسكاريد والمركبات الفينولية ومثبطات الإنزيم في عينات البراز. الحمض النووي المنقى مناسب لتقنيات البيولوجيا الجزيئية مثل PCR وهضم الإنزيم والتهجين.

تم نقل بروتيناز K وRNase A في أكياس ثلج رطبة وتخزينها عند درجة -20؛ يتم نقل الكواشف الأخرى في درجة حرارة الغرفة، وتخزينها في درجة حرارة الغرفة، وتكون صالحة لمدة 12 شهرًا.

1. يرجى تحضير حمام مائي أو كتلة تسخين بدرجة حرارة 70 درجة مسبقًا.

2. إذا ترسب الكاشف، قم بإذابته عند 37 درجة، واستخدمه بعد العودة إلى درجة حرارة الغرفة.

3. قبل الاستخدام، أضف 30 مل من كحول الأيزوبروبيل إلى المخزن المؤقت SGB، وأضف 18 مل من الإيثانول اللامائي إلى المخزن المؤقت SGD، وأضف 49 مل من الإيثانول اللامائي إلى المخزن المؤقت PW.

1. وزن 100-200 ملغ عينة البراز في أنبوب الطرد المركزي 2 مل ووضع الأنبوب على الجليد (إذا كانت العينة سائلة، بيبيت 200 ميكرولتر في أنبوب الطرد المركزي)؛

2. أضف 600 ميكرولتر من المخزن المؤقت لجيش تحرير السودان، و15 ميكرولتر من بروتيناز K و0.25 جم من حبات الطحن (1 مم) في أنبوب الطرد المركزي. يوصي باستخدام طاحونة الأنسجة (KZ-III-F) لطحن (60 هرتز، 4 درجة، تشغيل 30 ثانية، إيقاف مؤقت 10 ثانية، طحن 5 مرات) حتى متجانس، أو استخدام أداة دوامة ليهز بشكل متقطع لمدة 1 دقيقة؛

3. يحضن عند 70 درجة لمدة 15 دقيقة. دوامة العينة 2-3 مرات أثناء الحضانة (إذا تم عزل الحمض النووي من البكتيريا إيجابية الجرام، يمكن زيادة درجة حرارة الحضانة إلى 95 درجة)؛

4. الطرد المركزي في درجة حرارة الغرفة عند 12، 000 دورة في الدقيقة (~ 13400 × ز) لمدة 10 دقائق، ماصة المادة طافية في أنبوب طرد مركزي جديد سعة 1.5 مل، مع الحرص على عدم نضح الراسب؛

5. أضف 10 ميكرولتر RNase A إلى المادة الطافية التي تم الحصول عليها في الخطوة السابقة، واخلط العينة بالكامل عن طريق voretxing، واحتضنها في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق، ثم أضف 0.3 مرة حجم المادة الطافية من المخزن المؤقت SLB في أنبوب الطرد المركزي قم بخلط العينة بالكامل عن طريق voretxing وحمام جليدي لمدة 5 دقائق؛

6. الطرد المركزي في درجة حرارة الغرفة عند 12، 000 دورة في الدقيقة (~ 13400 × ز) لمدة 5 دقائق، ماصة المادة طافية في أنبوب طرد مركزي جديد 1.5 مل، مع الحرص على عدم نضح المترسبات؛

7. أضف كمية متساوية من المخزن المؤقت SGB إلى أنبوب الطرد المركزي (تأكد من إضافة كحول الأيزوبروبيل قبل الاستخدام)، واستخدم الماصة للنفخ والخلط جيدًا (قد يحدث هطول)؛

8. نقل كل الخليط من الخطوة السابقة إلى عمود دوران الحمض النووي (يجب ألا تتجاوز كمية كل إضافة 600 ميكرولتر، إذا كان من الممكن إضافة أكثر من 600 ميكرولتر على دفعات)، جهاز الطرد المركزي في درجة حرارة الغرفة عند 12،{{4} } دورة في الدقيقة (~ 13400 × جم) لمدة دقيقة واحدة. تجاهل الترشيح ووضع عمود دوران الحمض النووي في أنبوب التجميع؛

أضف 500 ميكرولتر من المخزن المؤقت SGD (تأكد من إضافة الإيثانول اللامائي قبل الاستخدام) إلى عمود دوران الحمض النووي، وأجهزة الطرد المركزي في درجة حرارة الغرفة عند 12، 000 دورة في الدقيقة (~ 13400 × جم) لمدة دقيقة واحدة. تجاهل الترشيح ووضع عمود دوران الحمض النووي في أنبوب التجميع؛

10. أضف 600 ميكرولتر من المخزن المؤقت PW إلى عمود دوران الحمض النووي (تأكد من إضافة الإيثانول اللامائي قبل الاستخدام، أضف المخزن المؤقت PW على طول جدار الأنبوب للمساعدة في طرد الملح المتبقي من الجدار)، وأجهزة الطرد المركزي في درجة حرارة الغرفة عند 12 درجة. ، 000 دورة في الدقيقة (~ 13400 × جم) لمدة دقيقة واحدة. تجاهل الترشيح ووضع عمود دوران الحمض النووي في أنبوب التجميع؛

11. كرر الخطوة 10؛

12. أعد وضع عمود دوران الحمض النووي في أنبوب التجميع، جهاز الطرد المركزي في درجة حرارة الغرفة عند 12، 000 دورة في الدقيقة (~ 13400 × جم) لمدة دقيقتين، أخرج عمود دوران الحمض النووي وضعه على جهاز طرد مركزي جديد سعة 1.5 مل أنبوب؛

13. افتح غطاء عمود DNA Spin وضعه في درجة حرارة الغرفة لمدة 3-5 دقيقة لجعل الإيثانول المتبقي يتطاير تمامًا؛

14. أضف 50-100 ميكروليتر من المخزن المؤقت TE أو الماء الخالي من النيوكلياز إلى مركز الغشاء وضعه في درجة حرارة الغرفة لمدة دقيقتين. أجهزة الطرد المركزي في درجة حرارة الغرفة عند 12،000 دورة في الدقيقة لمدة 2 دقيقة وجمع محلول الحمض النووي. إذا كنت بحاجة إلى تركيز أعلى من الحمض النووي، فيمكن إعادة إضافة المحلول الذي تم الحصول عليه إلى عمود غزل الحمض النووي، ووضعه في درجة حرارة الغرفة لمدة دقيقتين وجهاز الطرد المركزي في درجة حرارة الغرفة عند 12،000 دورة في الدقيقة لمدة دقيقتين، وإزالة الحمض النووي مرة أخرى .

1. قبل التشغيل، تأكد من قراءة دليل المنتج هذا بعناية.

2. ارتداء معطف المختبر والقفازات القابل للتصرف أثناء العملية.

3. إذا كانت عينة البراز جافة، يرجى زيادة كمية Buffer SLA إلى 1 مل، أو تقليل وزن العينة، مقلوبة عدة مرات والوقوف في درجة حرارة الغرفة لمدة 3-5 دقيقة بعد إضافة Buffer SLA، وإلا سوف يتأثر إنتاج الحمض النووي.

4. إذا كنت بحاجة إلى حضانة 95 درجة، يرجى فتح غطاء أنبوب الطرد المركزي مرة واحدة عندما تصل درجة الحرارة إلى 95 درجة، وتفريغ الغاز في أنبوب الطرد المركزي، ثم إغلاق غطاء أنبوب الطرد المركزي بإحكام لمنع الغاز في أنبوب الطرد المركزي من التوسع وانفجار الغطاء، مما يؤدي إلى تناثر عينات البراز.

5. بعض الكواشف متطايرة أو مؤكسدة، ويجب تجنب التعرض الطويل للهواء، ويجب إغلاق الكاشف في الوقت المناسب بعد الاستخدام.

للاستخدام البحثي فقط!

الوسم : طقم الحمض النووي للبراز، الصين طقم الحمض النووي للبراز المصنعين والموردين والمصنع