مقدمة المنتج

اسم المنتج	رقم القط.	المواصفات.
مجموعة RNA النباتية للسكريات والبوليفينولات	G3641-50T	50T

وصف المنتج/مقدمة

يمكن لهذه المجموعة استخراج الحمض النووي الريبي (RNA) من عينات الأنسجة النباتية المختلفة (مثل الأوراق والبذور والفواكه وما إلى ذلك) الغنية بالسكريات والبوليفينول باستخدام نظام تحلل خاص مدمج مع طريقة تنقية غشاء هلام السيليكا. يمكن لهذه المجموعة أن تزيل بشكل فعال السكريات والبوليفينول والبروتينات وشظايا الخلايا والشوائب الأخرى في عينات الأنسجة النباتية، ويمكنها تنقية ما يصل إلى عشرات الميكروجرامات من الحمض النووي الريبي (RNA) عالي النقاء والتكامل من 20-200 ملغ من عينة الأنسجة النباتية خلال واحد ساعة. ليست هناك حاجة إلى الكواشف العضوية مثل الفينول والكلوروفورم. يمكن استخدام الحمض النووي الريبي عالي النقاء المستخرج مباشرة في تجارب البيولوجيا الجزيئية المختلفة مثل التهجين الشمالي، والتهجين الموضعي، وتنقية الرنا المرسال، والترجمة في المختبر، وRT-PCR، وRT-qPCR، وبناء مكتبة cDNA، وما إلى ذلك.

شروط التخزين والمناولة

يتم نقل محلول DNase, DTT في الثلج الرطب وتخزينه عند درجة -20; يتم نقل الكواشف المتبقية وتخزينها في درجة حرارة الغرفة؛ تاريخ انتهاء الصلاحية هو 12 شهرا.

محتويات المنتج

رقم المكون	عنصر	G3641-50T
G3641-1	المخزن المؤقت PRL1	30 مل
G3641-2	المخزن المؤقت PRL2	8 مل
G3641-3	المخزن المؤقت PRL3	30 مل
G3641-4	المخزن المؤقت RWA	18 مل
G3641-5	المخزن المؤقت RWB	20 مل
G3641-6	حل دي تي تي	1.2 مل
G3641-7	الدناز	250 μL
G3641-8	10 × DNase العازلة	500 μL
G3641-9	مياه خالية من نوكلياز	10 مل
G3641-10	أعمدة تدور RNA (مع أنابيب التجميع)	50 مجموعة
يدوي		نسخة واحدة

قبل البدء (يرجى القراءة بعناية)

1. في حالة ترسب المخزن المؤقت PRL1، يرجى تسخينه عند 37 درجة واستخدامه عند إعادته إلى درجة حرارة الغرفة.

2. قبل الاستخدام، يرجى إضافة محلول DTT إلى المخزن المؤقت PRL3 حتى يصل التركيز النهائي إلى 4%، أي إضافة 40 ميكرولتر من محلول DTT إلى المخزن المؤقت PRL3 1 مل. من الأفضل إعداد هذه المحللة الطازجة، ويمكن تخزين المخزن المؤقت PRL3 المضاف إلى DTT Solution عند درجة حرارة 4 لمدة شهر واحد.

3. قبل الاستخدام، يرجى إضافة 12 مل من الإيثانول المطلق إلى المخزن المؤقت RWA و80 مل من الإيثانول المطلق إلى المخزن المؤقت RWB.

4. عند الطحن بالمطحنة، قم بتبريد المطحنة مسبقًا.

بروتوكول / إجراءات الفحص

1. تحلل الأنسجة النباتية :

أ. بالنسبة لأوراق النبات، حجم العينة الموصى به هو {{0}} مجم. انقل الأنسجة النباتية الطازجة أو المحفوظة بالتبريد إلى أنبوب طحن خالي من النيوكلياز سعة 2.0 مل (يوصى به HT-200-M) يحتوي على حبات زركونيا 3-4 3 مم (يوصى به G0203-150G) ويتم تبريده مسبقًا بالسائل نتروجين. ضع أنبوب الطحن على المطحنة (يوصى به KZ-5F-3D) (قم بتبريد المحول مسبقًا في النيتروجين السائل بسرعة قبل وضع أنبوب الطحن. إجراء الطحن الموصى به: اضبط التردد على 60 هرتز، ودرجة الحرارة إلى 4 درجة، تطحن لمدة 30 ثانية في كل مرة، تكرر العملية 4 مرات، مع فاصل 5 ثوان بين كل طحن) وتطحن حتى تصبح مسحوقًا بالكامل (إذا لم يتم طحن الأنسجة بالكامل إلى مسحوق، فإنه سوف يؤثر على العائد وجودة الحمض النووي الريبي (RNA) يمكن تمديد أوقات الطحن حتى يتم طحن الأنسجة بالكامل). بمجرد الانتهاء من الطحن، أضف 500 ميكرولتر من المخزن المؤقت PRL1 إلى أنبوب الطحن، واخلط المحتويات رأسًا على عقب واحتضانها عند درجة 56 لمدة 15 دقيقة، مع الخلط رأسًا على عقب كل 5 دقائق.

ب. بالنسبة لبذور النباتات، حجم العينة الموصى به هو {{0}} مجم، و100-200 مجم للفواكه. أضف 500 ميكرولتر من المخزن المؤقت PRL1 إلى أنبوب طحن خالي من النيوكلياز سعة 2.0 مل (يوصى به HT-200-M) مقدمًا، ثم أضف 3-4 4 خرزات فولاذية مم (يوصى بها G{{9) }}ز). نقل الأنسجة النباتية الطازجة أو المحفوظة بالتبريد إلى أنبوب طحن خالية من نوكلياز 2.0 مل. ضع أنبوب الطحن على المطحنة (يوصى به KZ-5F-3D) (إجراء الطحن الموصى به: اضبط التردد على 70 هرتز، ودرجة الحرارة على 4 درجات، واطحن لمدة 30 ثانية في كل مرة، وكرر العملية 20-30 مرات، بفاصل 5 ثواني بين كل طحنة) وتطحن حتى تتجانس تمامًا (إذا لم يتم طحن الأنسجة بالكامل للتجانس، فسيؤثر ذلك على المحصول ونوعية الحمض النووي الريبي (RNA) يمكن تمديدها حتى يتم طحن الأنسجة بالكامل). بمجرد الانتهاء من الطحن، احتضان عند 56 درجة لمدة 15 دقيقة، خلط رأسا على عقب كل 5 دقائق.

2. أجهزة الطرد المركزي عند 12،000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة، قم بنقل المادة طافية إلى أنبوب طرد مركزي جديد سعة 1.5 مل. أضف 1/5 حجم المادة الطافية من Buffer PRL2، واقلبها بالكامل رأسًا على عقب واخلطها جيدًا.

3. جهاز الطرد المركزي عند 12،000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق عند 4 درجة، انقل المادة الطافية إلى أنبوب طرد مركزي جديد سعة 2.0 مل. أضف 500 ميكرولتر من المخزن المؤقت PRL3 إلى المادة الطافية (تأكد من إضافة محلول DTT قبل الاستخدام)، ثم قلبه بالكامل رأسًا على عقب واخلطه جيدًا.

4. أضف نصف حجم الأيزوبروبانول إلى الخليط من الخطوة السابقة، واقلبه بالكامل رأسًا على عقب واخلطه جيدًا.

5. نقل الخليط إلى العمود تدور RNA. كل إضافة لا تتجاوز 600 ميكرولتر، وإذا تجاوزت يمكن إضافتها على دفعات.

6. جهاز الطرد المركزي عند 12،000 دورة في الدقيقة لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة، وتخلص من المرشح. ضع عمود الدوران RNA مرة أخرى في أنبوب التجميع.

7. أضف 500 ميكرولتر من المخزن المؤقت RWA إلى عمود RNA Spin، وأجهزة الطرد المركزي عند 12،000 دورة في الدقيقة لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة، ثم تخلص من المرشح.

8. أضف 600 ميكرولتر من المخزن المؤقت RWB إلى عمود دوران RNA (يرجى إضافة المخزن المؤقت RWB على طول جدار الأنبوب للمساعدة في طرد الملح المتبقي على جدار الأنبوب)، وأجهزة الطرد المركزي عند 12،000 دورة في الدقيقة لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة، ثم تجاهل الترشيح.

9. هضم الدناز:

أ) إعداد محلول تفاعل الدناز: مزيج 5 ميكروليتر 10 × الدناز العازلة، 5 ميكروليتر الدناز، 40 ميكروليتر من الماء الخالي من النيوكلياز في أنبوب طرد مركزي جديد خالٍ من النيوكلياز سعة 1.5 مل؛

ب) إضافة 50 ميكروليتر من محلول تفاعل الدناز إلى مركز عمود الدوران RNA، والوقوف عند درجة حرارة الغرفة عند 15 دقيقة؛

ج) أضف 500 ميكرولتر من المخزن المؤقت RWB إلى عمود RNA Spin، وأجهزة الطرد المركزي عند 12، 000 دورة في الدقيقة لمدة 30 ثانية في درجة حرارة الغرفة، ثم تخلص من المرشح. ضع عمود RNA Spin مرة أخرى في أنبوب التجميع.

10. كرر الخطوة 8.

11. ضع عمود RNA Spin في أنبوب التجميع، جهاز الطرد المركزي عند 12، 000 دورة في الدقيقة لمدة دقيقتين في درجة حرارة الغرفة لإزالة السائل المتبقي.

12. نقل عمود دوران الحمض النووي الريبي (RNA Spin Column) إلى أنبوب طرد مركزي جديد خالٍ من نوكلياز سعة 1.5 مل، والوقوف في درجة حرارة الغرفة لمدة 3 ~ 5 دقائق، بحيث يمكن أن يتبخر الإيثانول المتبقي من عمود دوران الحمض النووي الريبي (RNA) تمامًا.

13. أضف 50-100 ميكروليتر من الماء الخالي من النيوكلياز إلى مركز عمود دوران الحمض النووي الريبي (RNA)، واتركه عند درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق. أجهزة الطرد المركزي عند 12،000 دورة في الدقيقة لمدة دقيقتين في درجة حرارة الغرفة لجمع الحمض النووي الريبي. للحصول على تركيز أعلى من الحمض النووي الريبي (RNA)، يمكنك أيضًا إضافة أول شاطف مرة أخرى إلى عمود RNA Spin، ثم الوقوف في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق وجهاز الطرد المركزي عند 12،000 دورة في الدقيقة لمدة دقيقتين في درجة حرارة الغرفة لجمع الحمض النووي الريبي (RNA) مرة أخرى .

ملحوظة

1. يرجى ارتداء معطف المختبر والقفازات التي تستخدم لمرة واحدة عند التشغيل.

2. استخدم المنتجات والنصائح البلاستيكية الخالية من RNase لتجنب التلوث المتبادل.

3. استخدم منضدة اختبار خاصة ومعدات رحلان كهربائي لتشغيل الحمض النووي الريبوزي (RNA)، وارتدِ قناعًا أثناء التشغيل لمنع الأدوات والكواشف المستخدمة من تلوث RNase.

4. إذا تم جمع عينات نباتية خارج المختبر، فيجب وضع العينات في النيتروجين السائل لتجنب التأثير على إنتاجية وجودة الحمض النووي الريبي (RNA).

5. بالنسبة للعينات التي تحتوي على محتوى مائي أكبر، يمكن زيادة حجم العينة الأولي بشكل مناسب.

جدول

يظهر في الجدول أدناه إنتاجية الحمض النووي الريبي (RNA) المستخرج من مجموعة متنوعة من عينات النباتات والفطريات بواسطة هذه المجموعة. يرتبط إنتاج الحمض النووي الريبي (RNA) بأنواع النباتات وأعضائها ونضارتها وحالة نموها. الجدول التالي هو للإشارة فقط.

نوع العينة	اسم العينة	العائد الحمض النووي الريبي
ورقة	الجوسيبيوم هيرسوتوم	40-45 ميكروغرام/80 ملغ
	روزا تشينينسيس	50-60 ميكروغرام/50 ملغ
	صنوبر	5-8 ميكروغرام/50 ملغ
	بريوفيلوم بيناتوم	5-8 ميكروغرام/150 ملغ
بذرة	أراكيس نقص الدم	15-20 ميكروغرام/50 ملغ
	تريتيكوم إيستيفوم	5-8 ميكروغرام/50 ملغ
	براسيكا نابوس	20-25 ميكروغرام/20 ملغ
	الجوسيبيوم هيرسوتوم	20-25 ميكروغرام/20 ملغ
الفاكهة	ليكوبرسيكون اسكولينتوم	20-25 ميكروغرام/150 ملغ
درنة	السلانوم الحدبي	10-13 ميكروغرام/200 ملغ