مجموعة تحويل ثنائي كبريتيت DNA من MagBind MethylGold

 

اسم المنتج	رقم القط.	المواصفات.
مجموعة تحويل ثنائي كبريتيت DNA من MagBind MethylGold	G3639-50T	50 T

 

 

علم الوراثة اللاجينية هو أحد فروع علم الوراثة الذي يدرس التغيرات الوراثية في التعبير الجيني وتنظيمه دون تغيير تسلسل النيوكليوتيدات في الجينات. من بينها، تعد عملية مثيلة الحمض النووي هي أقدم آليات التنظيم اللاجيني المكتشفة وواحدة من أكثر آليات التنظيم اللاجيني التي تمت دراستها بعمق. في العديد من الحيوانات والنباتات، تعتمد مثيلة الحمض النووي على S-AdenosylMethionine كمانح للميثيل، تحت تحفيز ميثيل ترانسفيراز، يرتبط موضع الكربون الخامس لحلقة السيتوزين تساهميًا بمجموعة ميثيل.

مثيلة الحمض النووي هي حدث طبيعي يحدث في بدائيات النوى وحقيقيات النوى. في بدائيات النوى، تحمي مثيلة الحمض النووي الحمض النووي المضيف من الهضم عن طريق تقييد النواة النووية، والتي يمكن أن تقضي على الحمض النووي الخارجي. في حقيقيات النوى العليا، تلعب مثيلة الحمض النووي دورًا مهمًا في تنظيم التعبير الجيني.

يستخدم المنتج ثنائي كبريتيت لعلاج الحمض النووي الميثلي وتحويل السيتوزين غير الميثيل إلى يوراسيل، في حين يظل السيتوزين الميثيل دون تغيير، ويمكن إكمال العملية برمتها في غضون 4 ساعات، ويمكن أن تصل كفاءة التحويل إلى أكثر من 99٪. في الوقت نفسه، تتبنى المجموعة طريقة إزالة الكبريت واستعادة الحمض النووي على الخرز المغناطيسي، والتي يمكن أن تحسن بشكل فعال كمية استرداد الحمض النووي المحول، وتدفق العملية برمته بسيط للغاية. يمكن استخدام الحمض النووي المحول لتضخيم PCR وتحليل المصب، بما في ذلك تقييد هضم نوكلياز الداخلي، والتسلسل، والمصفوفة الدقيقة، وما إلى ذلك.

 

 

يتم شحنها وتخزينها في درجة حرارة الغرفة؛ صالحة لمدة 12 شهرا.

 

 

رقم المكون	عنصر	G3639-50T
G3639-1	كاشف التحويل المقطعي	10 مرات / أنبوب × 5
G3639-2	المخزن المؤقت BM	1.5 مل
G3639-3	المخزن المؤقت غيغابايت	10 مل
G3639-4	قاعدة بيانات المخزن المؤقت	3.6 مل (8.4 مل من الإيثانول اللامائي يضاف قبل الاستخدام)
G3639-5	العازلة PW	24 مل (56 مل من الإيثانول اللامائي يضاف قبل الاستخدام)
G3639-6	حبات سويماج	1 مل
G3639-7	مياه خالية من نوكلياز	10 مل
يدوي		نسخة واحدة

 

 

1. أضف 280 ميكرولتر من المخزن المؤقت BM و910 ميكرولتر من الماء الخالي من النيوكلياز إلى كاشف التحويل المقطعي قبل الاستخدام، ثم قم بإذابته في دوامة وتخزينه عند درجة -20.

2. يرجى إضافة 8.4 مل من الإيثانول اللامائي إلى Buffer DB قبل الاستخدام، وإضافة 56 مل من الكحول اللامائي إلى Buffer PW، واخلطه جيدًا واستخدمه.

3. هناك حاجة إلى حوامل مغناطيسية والأيزوبروبانول ولكن لا يتم توفيرها في هذه المجموعة.

 

 

1. أضف 20 ميكرولتر من الحمض النووي الجينومي (الكمية الإجمالية هي 500 نانوغرام -2000 نانوغرام، وإذا كان الحجم أقل من 20 ميكرولتر، فيمكن استكماله بالمياه الخالية من النيوكلياز) إلى أنبوب PCR. أضف 130 ميكرولتر من كاشف التحويل CT واخلطه بلطف باستخدام ماصة.

2. انقل خليط الخطوة الأولى إلى جهاز PCR واضبطه على 98 درجة لمدة 10 دقائق و64 درجة لمدة 2.5 ساعة. بعد التشغيل، يتم تخزين المنتج في درجة حرارة 4 درجات.

3. أضف 150 ميكرولتر من Buffer GB و130 ميكرولتر من الأيزوبروبانول إلى المنتجات المذكورة أعلاه، واستخدم ماصة لخلطها جيدًا، ثم أضف 15 ميكرولتر من خرز SweMag (توزع الدوامة بالتساوي قبل الاستخدام)، واستخدم ماصة للنفخ حتى يتم توزيع الخرز بشكل موحد. .

4. قف في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. خلال هذه الفترة، امزج بالتساوي لمدة 3 إلى 4 مرات باستخدام ماصة للحفاظ على الخرز المغناطيسي مشتتًا بشكل موحد.

5. انقل أنبوب الطرد المركزي إلى الحامل المغناطيسي واتركه لمدة 30 ثانية، بحيث يتم امتصاص الخرز المغناطيسي على جدار الأنبوب. عندما يكون واضحا، تجاهل المادة طافية (من أجل تجنب التأثير على كفاءة الاستخراج، لا تمتص الخرز المغناطيسي بها).

6. قم بإزالة أنبوب الطرد المركزي من الحامل المغناطيسي، وأضف 400 ميكرولتر من المخزن المؤقت PW، ثم انفخ باستخدام ماصة حتى يتم تفريق الخرز المغناطيسي بالتساوي. ثم انقل أنبوب الطرد المركزي إلى الحامل المغناطيسي واتركه لمدة 30 ثانية، بحيث يتم امتصاص الخرز المغناطيسي على جدار الأنبوب. عندما يكون واضحا، تجاهل المادة طافية (من أجل تجنب التأثير على كفاءة الاستخراج، لا تمتص الخرز المغناطيسي بها).

7. قم بإزالة أنبوب الطرد المركزي من الحامل المغناطيسي، وأضف 200 ميكرولتر من المخزن المؤقت DB، ثم انفخه باستخدام ماصة حتى تتشتت الخرزات المغناطيسية بالتساوي، ثم قف في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة، واخلط كل 3 إلى 5 دقائق خلال الفترة (Buffer DB يجب ألا يكون وقت المعالجة طويلاً للغاية، وذلك لتجنب التجزئة المفرطة للحمض النووي الجينومي). انقل أنبوب الطرد المركزي إلى الحامل المغناطيسي واتركه لمدة 30 ثانية، بحيث يتم امتصاص الخرز المغناطيسي على جدار الأنبوب، وبعد أن يصبح واضحًا، تخلص من المادة الطافية (لتجنب التأثير على كفاءة الاستخراج، لا تمتص الخرز المغناطيسي خارج).

8. قم بإزالة أنبوب الطرد المركزي من الحامل المغناطيسي، وأضف 400 ميكرولتر من المخزن المؤقت PW، ثم انفخه باستخدام ماصة حتى يتم تفريق الخرز المغناطيسي بالتساوي. ثم انقل أنبوب الطرد المركزي إلى الحامل المغناطيسي واتركه لمدة 30 ثانية، بحيث يتم امتصاص الخرز المغناطيسي على جدار الأنبوب. عندما يكون واضحا، تجاهل المادة طافية (من أجل تجنب التأثير على كفاءة الاستخراج، لا تمتص الخرز المغناطيسي بها).

9. كرر الخطوة 8.

10. افتح غطاء أنبوب الطرد المركزي، واتركه في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 ~ 10 دقائق أو عند 65 درجة لمدة 3 ~ 5 دقائق لجعل الإيثانول يتبخر تمامًا (لا تجعل الخرز المغناطيسي جافًا جدًا، حتى لا يؤثر على العائد من الحمض النووي).

11. قم بإزالة أنبوب الطرد المركزي من الحامل المغناطيسي، وأضف 30 إلى 50 ميكرولتر من الماء الخالي من النيوكلياز إلى أنبوب الطرد المركزي، ثم انفخ حتى تتوزع الخرزات المغناطيسية بالتساوي باستخدام ماصة، ثم قف في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق.

12. انقل أنبوب الطرد المركزي إلى الحامل المغناطيسي حتى يتم امتصاص الخرز المغناطيسي بالكامل، وامتصاص المادة الطافية في أنبوب طرد مركزي جديد للحصول على محلول الحمض النووي المحول.

 

 

1. يرجى قراءة دليل المنتج بعناية قبل الاستخدام.

2. تترسب الخرزات المغناطيسية بسهولة ويجب رجها أو دوامتها جيدًا قبل الاستخدام.

3. لا ينبغي أن يكون وقت معالجة Buffer DB طويلاً جدًا، فمن السهل أن يتسبب في تجزئة مفرطة للحمض النووي ويؤثر على تجارب المتابعة.

4. قبل الشطف، يجب أن يتم تطاير الإيثانول بالكامل لتجنب تأثير الإيثانول المتبقي في تجارب المصب.

5. يرجى عدم تجفيف الخرز المغناطيسي لفترة طويلة، لأن ذلك قد يتسبب في تراكم الخرز بشكل لا رجعة فيه.

6. يجب تخزين الحمض النووي المستعاد عند درجة -20 لتجنب تكرار التجميد والذوبان.

7. من أجل سلامتك وصحتك، يرجى ارتداء معطف المختبر والقفازات التي تستخدم لمرة واحدة.

 

للاستخدام البحثي فقط!

 

 

الوسم : مجموعة تحويل magbind methylgold dna bisulfite، الصين مجموعة تحويل magbind methylgold dna bisulfite المصنعين والموردين والمصنع